培養(yǎng)基傾注的適宜溫度大約為45℃-50℃。可以用手心和手背的感覺來大致判斷溫度，手心感覺不燙，而手背感覺燙手時(shí)，溫度大概就是50℃左右。溫度過高會導(dǎo)致凝固時(shí)間延長，且皿蓋上會有大量冷凝水，不利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；溫度過低則可能導(dǎo)致倒板過程中瓶中培養(yǎng)基部分凝固。

二、靜置時(shí)間

培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)放置在水浴或烘箱中保溫，使用前拿出直接倒板。培養(yǎng)基的靜置時(shí)間不宜過長，一般不超過4小時(shí)，以避免瓊脂少量凝固。

三、平板準(zhǔn)備

倒皿前，平皿應(yīng)預(yù)熱保持在35℃-40℃的溫度。如果需要表面接種，有冷凝水的平板表面容易產(chǎn)生蔓延菌落。這時(shí)可放在有對流的無菌凈化臺中吹干培養(yǎng)基表面，但不能過度干燥，否則培養(yǎng)過程中平板容易開裂。

四、傾注量與混合

平板傾注量一般在18-20mL左右。如果培養(yǎng)時(shí)間超過48小時(shí)或培養(yǎng)溫度高于40℃，為防止水分過量蒸發(fā)導(dǎo)致平板開裂，傾注量一般為25mL左右。傾注時(shí)盡量貼著平皿壁緩慢倒入，將氣泡留在瓶子底部。如果平板中有少量氣泡，可以把氣泡輕搖到平板壁上，這樣不會影響結(jié)果觀察。另外，每個(gè)平板中加入融化后的瓊脂培養(yǎng)基時(shí)，要迅速往復(fù)搖動(dòng)和轉(zhuǎn)圈晃動(dòng)5-15次，使培養(yǎng)基與接種物充分混合。

五、避免污染

在整個(gè)操作過程中，需要注意避免污染。使用前需將裝有培養(yǎng)基的瓶子或試管弄松，然后放在滾水或蒸汽浴里進(jìn)行溶解，要小心避免培養(yǎng)基過熱變質(zhì)。已消毒培養(yǎng)皿的數(shù)量要比所測樣品的數(shù)量多一個(gè)，用作空白對照

六、培養(yǎng)

待平板冷卻后翻轉(zhuǎn)并置于適當(dāng)?shù)臏囟认屡囵B(yǎng)。倒平板后，可以打開皿蓋，讓其在超凈臺中凝固5分鐘后再關(guān)閉皿蓋，倒置放置備用；也可以采用一個(gè)接一個(gè)地倒置培養(yǎng)皿的方式，直到全部凝固后再倒置備用，這樣可以有效地減少皿蓋上的水蒸氣產(chǎn)生。