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        原代細胞骨架的染色方法

        放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-08-29  來源:實驗室資訊網(wǎng)
        核心提示:微絲的顯示方法步驟: 1. 用PBS液漂洗蓋片培養(yǎng)的原代細胞3次,每次30s; 2. 用2%的甲醛/PBS液固定原代細胞3min; 3. 用0.5
         微絲的顯示方法步驟:
              1.  用PBS液漂洗蓋片培養(yǎng)的原代細胞3次,每次30s;
              2.  用2%的甲醛/PBS液固定原代細胞3min;
              3.  用0.5%的三硝基甲苯/PBS處理3次,每次10min;
              4.  PBS漂洗3次;
              5.  用羅丹明(rhodamine)標記的鬼筆環(huán)肽(phalloidin)(1:10)室溫中反應15min;
              6.  PBS漂洗3次;
              7.  60%甘油+熒光防淬劑封片;
              8.  熒光顯微鏡觀察;
         
         微管的顯示方法:
              1.  用PBS液漂洗蓋玻片的原代細胞3次,每次30s;
              2.  在室溫中用3%甲醛/PBS固定20min;
              3.  用PBS液再漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的PBS液;
              4.  投入冷丙酮中(-10—-20℃)7min;
              5.  用PBS漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的PBS液;
              6.  向直徑6cm的干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級抗微管蛋白抗體,令小蓋片細胞面向下扣在抗體液上,覆以皿蓋,于37℃溫箱中放置45min—1h;
              7.  向碟皿內(nèi)勻速緩慢滴加PBS,令蓋片浮起在液面,用鑷子夾出,按步驟3處理;
              8.  向干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標記的二抗,其后操作按步驟6進行;
              9.  按步驟7和3操作;
              10. 滴pH8.5的90%的甘油/PBS少許于載玻片上,把小蓋片的原代細胞面覆在大蓋片上;
              11. 將蓋片置于熒光顯微鏡下觀察;
         
        編輯:songjiajie2010

         
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