亚洲中文字幕页面|国产露脸精品国产沙发|日韩亚洲欧美精品综合拍摄|日产日韩亚洲欧美综合在线

  • <delect id="cctnl"></delect>
        <strike id="cctnl"></strike>
      1. VIP標(biāo)識 上網(wǎng)做生意,首選VIP會員| 設(shè)為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
        食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號
         

        常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳檢測細胞凋亡

        放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

        方法一:

        1.收集細胞(5×106)1000r/min,離心5min,去上清。
        2.PBS洗一次,1000r/min,離心5min,去上清。
        3.加細胞核裂解液500μl重懸細胞,50℃水浴,3~5h,不時振搖或37℃過夜。
        4.加0.5ml平衡酚抽提,上下顛倒幾次混勻,6000r/min,離心5min。
        5.上清移至另一Ep管,加0.5ml氯仿:異戊醇抽提,上下顛倒幾次混勻,6000r/min,離心5min。
        6.上清移至另一Ep管,加50μl的3mol/L乙酸鈉和2ml預(yù)冷無水乙醇,上下顛倒幾次混勻,可見絮狀白色沉淀物。
        7.置液氮5~10min,12 000r/min離心10min沉淀DNA,去上清,真空抽干或風(fēng)扇下吹干殘存液體。
        8.加50~100μl TE緩沖液,另加5μl RNase,37℃水浴30min。
        9.取20μl加上樣緩沖液2~5μl,1%瓊脂糖凝膠電泳(電壓50V,1.5~2h),UV下觀察。


        方法二:
        1.離心收集細胞(5×106),PBS(無Ca2+和Mg2+)洗1~2次。
        2.0.5ml TBE溶液重懸,37℃孵育30min。
        3.1mg/ml蛋白酶K 37℃處理30min。
        4.加入上樣緩沖液0.1ml。
        5.25μl上樣,1.5%的瓊脂糖凝膠上電泳,2V/cm 6h。


        方法三:
        1.收集細胞懸液(106細胞),低速離心(1000r/min,離心5min)。
        2.去上清,沉淀加0.4ml低滲緩沖液作用1h。
        3.13 000r/min,離心10min,將上清轉(zhuǎn)移至另一Eppendorf管中,加等量50%異丙醇和0.5mol/L NaCl混勻,置液氮5min。
        4.12 000r/min,離心10min,棄上清,沉淀真空抽干。
        5.加TE 100μl,65℃加熱10min,取20μl,加1~2μl上樣緩沖液,電泳觀察。


        方法四:
        1. 收集細胞,1000r/min離心5min,去上清。
        2.用冰預(yù)冷的70%乙醇固定,可長期保存于-20℃冰箱。
        3.1000r/min離心5min,去除固定液,用約0.5ml的PBS重懸細胞。
        4.轉(zhuǎn)入Eppendorf管中,同法離心,去上清。
        5.細胞用40μl PC緩沖液重懸,室溫30~60min。
        6.1000r/min離心5min,吸上清于新的Eppendorf管中,真空濃縮15min。
        7.加入0.25% NP-40溶液3μl,1mg/ml RNase A溶液3μl,37℃,30min。
        8.加入3μl蛋白酶K,37℃,30min。
        9.加入12μl樣品稀釋液,含溴化乙錠的1.5%瓊脂糖電泳,觀察。

         

         

         
        推薦圖文
        推薦食品專題
        點擊排行
         
         
        Processed in 5.874 second(s), 1378 queries, Memory 3.8 M