（1）石蠟切片脫蠟入水后，置0.1mol/l PBS pH7.2沖洗5min；冰凍切片直接入PBS沖洗5min。
　�。�2）0.1mol/l 甘氨酸PBS沖洗5min。
　　（3）0.4%Trition X-100 PBS 沖洗15min。
　�。�4）蛋白酶K1μg/ml（0.1mol/l Tris –HCl pH8.0, 50mmol/L EDTA配）37℃保溫30min。
　�。�5）4%多聚甲醛PBS固定5min。
　�。�6）0.1mol/l PBS沖洗2×3min。
　�。�7）0.25%乙酸酐（0.1mol/l 三乙醇胺配制）10min。
　�。�8）2×SSC沖洗10min（1×SSC：0.15mol/l NaCl, 0.015mol/L 檸檬酸鈉）。
　�。�9）取10μl含相應(yīng)探針的雜交液滴于標(biāo)本上，如果是cDNA探針則用前將探針于95℃水浴中保溫10min，馬上放入冰浴中冷卻，然后再用。
　�。�10）蓋上22×22mm的硅化蓋片或合適大小的蠟?zāi)�，入溫�?3℃保溫12～16h。
　�。�11）4×SSC洗脫蓋片，并在同一液中37℃漂洗10～30min。
　�。�12）2×SSC（含20μg/mlRNaseA, 適于RNA探針）沖洗30min，37℃。
　�。�13）1×SSC，0.1×SSC,37℃各漂洗10～30min。
　�。�14）0.05mol/l PBS 沖洗4×5min。
　�。�15）3%BSA（0.4%Triton X-100 PBS配）37℃保溫30min。
　�。�16）Avidin –AKP(堿性磷酸酶)（1：500～1：100，0.4%Triton X-100 PBS配）室溫1～3h。
　�。�17）0.05mol/l PBS沖洗4×5min。
　�。�18）TSM1沖洗2×5min。
　　（19）TSM2沖洗2×5min。
　�。�20）硝基四氮唑藍(lán)（NBT）0.4%mg/ml 和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸（BCIP）0.2mg/ml混合液顯色，室溫，暗處3h。
　�。�21）20mmol/l EDTA,pH8.0終止顯色。
　�。�22）甘油明膠直接封片。