一、Western blot 技術(shù)起源

1975年，Edwin Southern發(fā)明了DNA雜交檢測技術(shù)，命名為Southern blot。1977年，James Alwine、David Kemp和George Stark發(fā)明了RNA雜交檢測技術(shù)，命名為Northern blot。兩年后位于美國斯坦福大學的George Stark發(fā)明了將蛋白從電泳凝膠上轉(zhuǎn)移到活化纖維素上的技術(shù)，隨后Harry Towbin發(fā)展出更快速、簡單的電轉(zhuǎn)技術(shù)。1981年Neal Burnette正式將這一技術(shù)命名為“Western blot”。

二、Western blot 用來干什么？

（一）確定目的蛋白的表達情況

這是Western blot最常規(guī)的應(yīng)用，如檢測患者的標本與正常人的標本、實驗條件處理后細胞與未處理的對照細胞之間目的蛋白的表達變化情況，通過灰度分析可以確定目的蛋白表達水平是升高還是降低。

（二）研究蛋白間的相互作用

這是與免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，CO-IP）技術(shù)相結(jié)合的一種檢測蛋白質(zhì)之間相互作用的常用方法。通過CO-IP技術(shù)將相互作用的蛋白質(zhì)復(fù)合體分離出來后進行凝膠電泳，然后利用相互作用的蛋白質(zhì)的特異性抗體進行檢測。適用于對已知的蛋白質(zhì)的相互作用進行檢測，不適用于檢測一個蛋白質(zhì)未知的相互作用蛋白；也可以用于蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用的后續(xù)分析。

（三）確定目的蛋白的細胞定位

通過分別提取細胞不同部位的蛋白質(zhì)，如膜蛋白、胞漿蛋白核蛋白或線粒體蛋白等，將分離出來的不同部位的蛋白質(zhì)進行Western blot檢測可以分別檢測目的蛋白在不同部位的表達情況。

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